沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较

第25卷 第4期 植 物 研 究V o. l 25 N o . 4 BULLET I N OF BOTAN ICAL RESEARCH 2005年 10月

O ct . , 2005

沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较

李春英 王 微 赵春建 刘晓娜 王延兵 赵 博 祖元刚

(东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室, 哈尔滨 150040)

*

摘 要 考察了引种于俄罗斯的大果沙棘不同部位总黄酮含量的差异。用超声提取作为沙棘总黄酮的制备方法; 以芦丁为对照品, 采用分光光度法作为沙棘总黄酮的测定方法。实验结果表明, 沙棘叶、果肉和果皮中总黄酮含量分别为1. 71%、0. 76%和0. 55%, 叶中总黄酮含量分别是果肉和果皮的2. 3倍和3. 1倍, 因此引种于俄罗斯的大果沙棘叶具有较大的开发价值和应用前景。

关键词 沙棘; 总黄酮; 超声提取; 分光光度法

Co mparison and deter m i nation of total fl avonoids i n different parts of

H i ppophae rha mnoi des

L I Chun-Y i n g WANG W e i ZHAO Chun -Jian LI U X i a o -Na WANG Yan -B ing

Z HAO Bo Z U Yuan -Gang

*

(K ey L aboratory of Fo restry P l ant E co l ogy , M i n i stry of Educa ti on , N ortheast F orestry U n i versity , H arb i n 150040)

Abstract The content d istr i b ution of to ta l fl a vono i d s i n different parts o f H i p pophae rhamnoides L . fro m Russia w as investigated . The sa m ple pretreat m en t process involved u ltrason ic extracti o n . The total fla -vono i d s w ere deter m i n ed by spectrophoto m etry , ruti n as contro l sa m ple . The experi m ent results show ed

t h at the contents of to tal flavono i d s i n lea, f pu l p and pericarp w ere respecti v e l y 1. 71%, 0. 76%and 0. 55%, that t h e m eans content of tota l flavonoids i n leaf is 2. 3and 3. 1ti m es higher than that in pulp and pericarp . Thereby the leaf of H ipp ophae rham noides L. fro m Russia has va l u e to be developed and used .

Key w ords H ipp o phae rhamnoides L. ; total flavono i d s ; u ltrason ic ex traction ; spectrophoto m etry 沙棘(H ipp o phae rham noides L . ) 为胡颓子科

[1]

(E laeagnaceae) 植物, 落叶灌木, 产于欧亚两洲。沙棘不仅是我国西部生态治理的优选植物, 而且具有很高的食用价值。随着人们认识到沙棘的神奇疗效, 以及它 绿色 、天然的属性, 开发沙棘资源成为世界关注的研究课题, 国内外对沙棘属植物中富含的多种生物活性物质作了大量的研究

[2~4]

成分, 它对于沙棘的质量控制有重要的意义。沙棘整株的各部位都含有黄酮类化合物, 但各部位总黄酮含量均存在较大的差异

[5]

。所以, 测定沙棘不

同部位的总黄酮显得尤为重要。目前, 国内研究较多的是中国沙棘, 对从国外引进的沙棘品种研究的较少。近年来, 超声技术在植物有效成分提取方面已显示出巨大的优势

[6, 7]

, 以。本研究以引种于俄罗

沙棘为主要原料研制的产品有:沙棘饮料、沙棘油、沙棘酒、沙棘食品等。

黄酮类化合物是沙棘中非常重要的生物活性

斯的大果沙棘为原料, 超声提取样品中的沙棘总黄酮, 分光光度法对沙棘不同部位(叶、果肉和果皮) 中的总黄酮含量进行了比较分析, 旨在为沙棘资源

基金项目:科技部科研条件升级改造项目(J G -2004-09); 新世纪优秀人才支持计划项目(NCET -04-0316) 第一作者简介:李春英(1976 ), 女, 博士研究生, 从事天然产物研究工作。* 通讯作者Au t h or f or corres pond ence E-m ai:l z ygor@l v i p . h. l cn

:17

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植 物 研 究 25卷

的综合利用和国内引种俄罗斯大果沙棘提供科学依据。1 实验部分

1. 1 仪器、试剂及原料

UV -4060紫外-可见分光光度计(Am ersha m Phar m acia B i o tech , 瑞典) BS210S 型电子天平(德国Sartori u s 公司); KQ -250DB 型超声波清洗仪(昆山市超声波仪器有限责任公司) 。

95%乙醇(分析纯); 三氯化铝(分析纯); 芦丁对照品(98%, 购于中国药品生物制品检定所) 。引种于俄罗斯的大果沙棘2004年8月中旬采自黑龙江省孙吴县大河口林场。1. 2 实验方法1. 2. 1 样品溶液制备

沙棘叶、果肉和果皮60 烘干, 粉碎, 过60目筛。精确称取沙棘叶、果肉和果皮粉2. 0g , 加30mL 85%乙醇静止浸泡2h 后, 按下面的超声方法提取:超声时间25m i n ; 超声温度45 ; 超声频率40KH z 。提取液过滤、定容、待测。1. 2. 2 对照品溶液及试剂的配制

芦丁对照品储备液配制:精密称取105 真空干燥至恒重的芦丁对照品0. 0025g , 加无水乙醇溶解后定容至5mL 容量瓶。

三氯化铝储备液配制:精密称取三氯化铝5. 0000g , 加无水乙醇溶解后定容至100mL 容量瓶。

1. 2. 3 标准工作曲线的建立

吸取芦丁对照品储备液100、200、300、400、

500、600 L , 分别置于10mL 容量瓶中, 向各容量

瓶中分别加三氯化铝储备液1mL, 用无水乙醇定容至刻度, 摇匀, 静置8m in , 以相应浓度的未加三氯化铝储备液的芦丁对照品溶液为空白, 于430nm 处测定吸光度。以芦丁浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标进行拟合, 得回归方程为:

y =39. 566x -0. 0162

芦丁浓度在0. 05~0. 30m g mL 范围内符

2

合朗伯 比尔定律, 相关系数r =0. 9976。2 结果与讨论

2. 1 分析方法的选择2. 1. 1 测定波长的选择

精确称取芦丁对照品适量, 用无水乙醇溶液制成0. 5m g mL 的溶液。另精确称取沙棘叶总黄酮样品适量, 同法制成乙醇溶液。取上述2种溶液, 按1. 2. 3项下的方法, 分别在200~600nm 波长范围进行吸收光谱扫描。光谱图表明, 对照品溶液及样品溶液与三氯化铝 乙醇溶液反应生成的螯合物在277nm 和430nm 处均有吸收峰。在277nm 测定时, 反应液吸光度测定值不稳定, 因而选择430nm 波长为沙棘叶总黄酮的测定波长。对照品及样品的紫外 可见光谱扫描见图1。2. 1. 2 三氯化铝用量的选择

吸取芦丁对照品溶液2. 0mL , 分别加入0. 40、0. 60、0. 80、1. 00、1. 20、1. 40、1. 60mL 三氯化铝储备液, 8m in 后按1. 2. 3项下的方法分别测定其吸光度(A) 值。从A 值分析, 三氯化铝溶液的用量在1mL 以上时, 其值达到稳定, 相对误差为0. 9%

-1

-1

图1 对照品(A ) 和样品(B) 的紫外 可见吸收光谱

F i g . 1 UV V isi b l e absorb spectru m of contro l sa m ple(A ) and sa m ple(B)

4期李春英等:沙棘不同部位总黄酮含量的测定及比较

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光度值进行测定, 结果见图2。

从图2可以看出, 在反应8m i n 后, 芦丁和沙棘叶总黄酮与铝盐生成的螯合物的吸光度趋于稳定, 完全可以用作定量分析, 所以选择8m i n 为显色稳定时间。2. 2 回收率和精密度试验

精密称取已测含量的沙棘叶、果肉和果皮的提取液若干份, 每份100mL , 加入一定量芦丁对照品, 混匀后, 分光光度法测定含量, 计算回收率, 结果表明, 叶、果肉和果皮提取液样品中黄酮的平均

图2 反应时间对吸光度的影响F i g . 2 Effect of reaction ti m e on abso rbency

回收率分别为98. 17%、99. 83%和100. 28%, 相对标准偏差分别为1. 08、1. 27和2. 85%。本方法所测沙棘不同部位总黄酮的含量, 相对标准偏差较小, 结果准确度高。

2. 3 提取方法对沙棘总黄酮提取率的影响以叶为原料, 应用不同提取方法对沙棘叶总黄酮进行了提取, 根据回归方程计算出总黄酮的提取率, 结果见表1。

所以选择三氯化铝溶液的最佳用量为1mL 。2. 1. 3 显色稳定时间的选择

为了考察沙棘叶总黄酮与三氯化铝形成有色螯合物反应完全、达到稳定时所需的时间, 在14m in 内, 每间隔2m in 对芦丁对照品及样品的吸

表1 不同样品制备方法对沙棘叶总黄酮提取率的影响(n=3)

T ab l e 1 E ffect o f different sa m ple preparation m ethods on y ie l d of t o ta l fl avono i ds in the H. rha m noi des leav es(n=3)

萃取方法Extracti on m et hod 回流提取Refl ux

索氏提取S oxh let extracti on 超声提取U l trason ic extracti on

萃取时间Extracti on ti m e(mi n)

12036030

液固比L i qu i d -s o li d rati o(mL g -1)

30:145:115:1

萃取率Extracti on yiel d(%)

0. 951. 711. 69

表2 沙棘不同部位总黄酮含量的测定结果(n=3) T able 2 De ter m i nati on of tota l fl avono i ds i n d iffe rent pa rts o f

H. rhamnoi des L . (n=3)

含量Content(%)

1. 72

叶L eaf

1. 711. 690. 76

果肉Pu l p

0. 750. 780. 58

果皮Pericarp

0. 560. 55

0. 56

2. 71

0. 76

2. 00

1. 71

0. 90

平均含量Con tent(%)

相对标准偏差RSD(%)

从表1可以看出, 应用回流提取法对沙棘叶总

黄酮的提取率明显偏低, 超声提取法与索氏提取法对沙棘叶总黄酮的提取率均较高, 考虑到超声提取所用时间短, 溶剂用量少, 操作步骤简单, 故选择超声法作为样品溶液的制备方法。2. 4 样品的测定

取沙棘叶、果肉和果皮若干份, 按1. 2. 1项下的方法提取总黄酮, 按1. 2. 3项下的方法测定提取液的吸光度, 根据回归方程计算出总黄酮的含量, 每个样品重复3次测定, 结果见表2。

从表2的结果可以看出, 叶中总黄酮含量最高, 分别是果肉、果皮的2. 3倍和3. 1倍, 沙棘叶、果肉和果皮中总黄酮的相对标准偏差均较小, 测定结果可靠。3 结论

部位Part

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植 物 研 究 25卷

a mnoides ) an i n -v itro study . Journal o f Ethnophar m aco logy , 2002, 79(3):373~378

3. G ao X, O hlander M, Jeppsson N, et al . Changes i n anti ox-i dant effects and t he ir re lati onship to phy tonutr i ents i n fru i ts of sea bucktho rn(H i ppophae rhamnoi d es L . ) duri ng m a t ura -ti on . Journa l of A gr i cultural and Food Che m i stry , 2000, 48(5) :1485~1490

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发和利用, 而对叶的利用率很低, 本文通过对引种

于俄罗斯的大果沙棘不同部位总黄酮含量的检测, 结果表明, 引种于俄罗斯的大果沙棘叶中总黄酮含量较高, 如果能利用叶作为原料, 进行化工及保健品的开发, 沙棘的应用前景将更加广泛。

本研究的结果不但为俄罗斯大果沙棘叶的综合利用开创了新思路而且为我国引种俄罗斯大果沙棘提供了科学依据。

致谢 实验中使用的沙棘原料由黑龙江省孙吴县林业局提供, 本实验室聂绍荃教授在鉴定方面给予了帮助, 在此深表谢意!

参 考 文 献

1. R ousiA. T he genus H i ppop hae L . A taxono m ic study . A nna l s Botany Fenn i c , i 1971, 8:177~227

2. S G eetha , M Sai R am, V S i ngh , et al . A nt-i ox i dant and i m -munomodu latory properties o f sea bucktho rn(H i pp ophae rh -

6. 赵春建, 李春英, 付玉杰, 等. 甘草多糖超声提取工艺及数学模拟. 应用化学, 2004, 21(11):1181~11837. 李庆勇, 付玉杰, 吕欣, 等. 超声提取刺五加中丁香甙的研究. 植物研究, 2003, 23(2):182~184


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